Diabetologia：诱导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现呼吸道自身细胞内质到浮现1M-肾病药理学征状的重大突破率在学龄前时期就有很差的描绘出，多个呼吸道自身细胞内质阳性的学龄前中会有70%在血清转成后10年内患上肾病，而随访15年的学龄前这一比重上升到84%。来得之下，占药理学1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的病症机制还没有给与必要的研究成果。

更加多的人开始适用分期管理系统来界定1M-肾病的重大突破：社会性在浮现多种呼吸道自身细胞内质时进入第1前期，浮现血糖异常时进入第2前期，浮现征状时进入第3前期。一些多发呼吸道自身细胞内质阳性的社会性，在1期和2期，重大突破快速速，并发展为病症的1M-肾病。我们之前描绘出了一第一组在首次检测到多种呼吸道自身细胞内质检验后至少10年无肾病的亦然慢速重大突破者，这第一组病症总数少，但特征更为明确。随后，我们发现呼吸道自身细胞内质特异性CD8+T细胞内催化在重大突破平稳速的病症中会大体不实际上，但在最近病症和长期实际上的肾病病症中会很容易检测到。这似乎说明，与重大突破病症来得，这些病症自身病原质的可调强化。

早期研究成果说明，尽管可调性T细胞内(Treg)数量正常，但肾病病症实际上一些新功能不足之处，其中会除此以外对IL-2的催化能力减低。此外，肾病病症中会的现象CD4+T细胞内似乎对可调更加具抵抗性，展示出为现象T细胞内的抑制作用消散，自然显现出的Treg和质外显现出的诱导Treg，以及细胞内质经历的CD4+T细胞内中会IL-2催化消散。本研究成果的目的是描绘出了CD4+可调性T细胞内(Treg)在一小群亦然平稳速重大突破者中会的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX研究成果是一项以许多人进一步将的纵向研究成果，在21岁以下肺癌的病症亲属中会检测1M-肾病的危险因素。我们之前描绘出了长期平稳速重大突破者的特征，他们保持多重呼吸道自身细胞内质阳性超过10年，但没有浮现肾病的药理学征状，慢速性或非来进行性自身免疫。随后，10名继续保持无肾病并愿意备有大量肝脏检验的平稳速重大突破者纳入T和B细胞内新功能归纳。在现有的研究成果中会，8名慢速重大突破者(SP第一组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的呼吸道自身细胞内质阳性。所有的参与者都处于1M-肾病重大突破的1期，尽管一些人随后一落千丈了呼吸道自身细胞内质对某些细胞内质的阳性催化，然而，一名病症不太可能处于2期至少6年，但没有浮现药理学征状，一名病症被诊断为肾病，该人脑72岁，在挖掘实验检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中会对该供质来进行了单独检验。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内拳法和T细胞内抑制作用试验检验供质中会Treg的频率、表M-和新功能。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和重回)来进行无监理聚类归纳，检验Treg表M-。

结果：与身质健康供质来得，来自慢速重大突破质的潜意识CD4+T细胞内的监理聚类说明了，触发的潜意识CD4+ Treg频率上升，与糖皮质激素诱导的TNFR相关细胞内(GITR)传达上升有关。一名HbA1c升高的病症与重大突破平稳速者和也就是说的对照第一组来得，Treg谱不尽相同。新功能归纳说明，与身质健康供质来得，来自平稳速重大突破质的Treg介导的CD4+现象T细胞内抑制作用相对来说受损。展示出为对现象CD4+T细胞内CD25和CD134传达的抑制作用上升。

平面图1 熟悉的表M-归纳说明了，CD4+Treg亚M-在慢速重大突破函数调用中会上升。由FlowSOM生成的Treg三楼，聚集在来自所有供质的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上面物传达鉴别出10个元簇:潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)适用9个各不相同Treg上面生成的10个元簇的MST。每个节点推选一个空降兵(100个空降兵)，更加大的元空降兵(10个元空降兵)在节点第一组外围装裱。每个节点中会的饼平面图暗示单个上面的传达级别。(b)每个元聚类的热平面图，以说明了整质上面传达。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)生成平面图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)来得同位素为每个metacluster装入新线平面图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞内(l)。蓝色左上方推选这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 适用CITRUS的归纳说明证实，Treg频率的上升是重大突破平稳速的标志。级别门控(a - f)和大豆归纳(g-k)来得SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的关联性。(a)流感病毒CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的传奇色彩平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR传达来进行分离，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(白点)和SP(黑斑)第一组以及供质SP 606(蓝色)中会CD25+ cd127的频率汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装入新线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达数值着色，左下角突出的簇被比对为SP和HD函数调用二者之间的各不相同。(j)装入新线平面图说明了了在SP(黑斑)和HD(灰点)第一组中会，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的来得同位素(比重)。(k)直方平面图说明了每个簇的表M-(粉红色)和Treg上面来得传达与氛围传达(蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面即刻，寄存器Treg_4。氛围与所有其他簇中会上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

平面图3 与身质健康献血者来得，重大突破平稳速者潜意识treg的GITR上升。每个潜意识CD4+T细胞内元簇(潜意识T细胞内_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞内;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞内;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达上面的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的传达热平面图(sp606不除此以外在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有供质除此以外，p< 0.05(蓝色)供质SP 606和也就是说的HD不除此以外在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR传达，从级别门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，说明了直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

平面图4 来自平稳速重大突破的CD4+ treg细胞内操控现象CD4+T细胞内的能力减低。SP第一组用蓝色的新线和左上方暗示，HD第一组用粉红色的新线和左上方暗示，蓝色的新线/左上方暗示供质sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被上面为CFSE, Treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培植3紧接著来进行流式细胞内拳法检测。(a-d)与CD4+需要的话者来得应将的treg培植(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培植。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑制作用比重(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用比重。适用阳性对照(触发的响应将细胞内都有treg)计数抑制作用比重。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

平面图5 现象CD4+T细胞内对平稳速重大突破的T细胞内酪氨酸的抑制作用更加敏感。SP第一组用蓝色的新线和左上方暗示，HD第一组用粉红色的新线和左上方暗示，蓝色的新线/左上方暗示供质sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel上面，treg按观察的比重滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸细胞内，培植3紧接著来进行流式细胞内拳法(CD25反染)和细胞内因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者联合培植。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑制作用次之(b)。(c,d) CD25抑制作用次之(c)和CD134抑制作用次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中会的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

假设：我们得出的假设是，来自平稳速重大突破子的酪氨酸潜意识CD4+Treg在GITR传达中会给与了扩展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1M-肾病危险性社会性中会的管理系统性的前提。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28