Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中慢慢地扩展

从第一次显现成来肝细胞自身酪氨酸到显现成来1改进型乳癌临床研究疼痛的令人满意率在幼儿时代就有很好的所述，多个肝细胞自身酪氨酸中性的幼儿里有70%在血清转化后10年内患乳癌，而随访15年的幼儿这一数量增高到84%。比起之下，占临床研究1改进型乳癌一半以上的改进型1改进型乳癌的病症机制还没有得到充分的深入研究。

更为多的人开始可用分期管理系统来度量1改进型乳癌的令人满意：幼体在显现成来多种肝细胞自身酪氨酸时踏入第1过渡阶段，显现成来血糖诱发时踏入第2过渡阶段，显现成来疼痛时踏入第3过渡阶段。一些多发肝细胞自身酪氨酸中性的幼体，在1期和2期，令人满意较慢，并发展为病症的1改进型乳癌。我们以后所述了一组成员在首次检验到多种肝细胞自身酪氨酸比对后至不及10年无乳癌的近乎慢令人满意者，这组成员症状人数不及，但特征非常恰当。随后，我们发现肝细胞自身酪氨酸酪氨酸CD8+T肝细胞重排在令人满意非常慢的症状里基本不不存在，但在近期病症和长期不存在的乳癌症状里很容易检验到。这不太可能暗示，与令人满意症状比起，这些症状自身炎症的通气强化。

早期深入研究暗示，尽管通气性T肝细胞(Treg)需求量出现诱发，但乳癌症状不存在一些新功能瑕疵，其里包括对IL-2的重排技能增加。此外，乳癌症状里的波动CD4+T肝细胞不太可能对通气更具抵抗性，显出为波动T肝细胞的抑止减弱，连续性激发的Treg和体内激发的游离Treg，以及酪氨酸经历的CD4+T肝细胞里IL-2重排减弱。本深入研究的目的是所述了CD4+通气性T肝细胞(Treg)在一小群近乎非常慢令人满意者里的特征，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

原理：BOX深入研究是一项以青年人为基础的纵向深入研究，在21岁表列发病的症状亲属里检验1改进型乳癌的危险因素。我们以后所述了长期非常慢令人满意者的特征，他们依然多重肝细胞自身酪氨酸中性超过10年，但没有显现成来乳癌的临床研究疼痛，慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续依然无乳癌并愿意提供大量血液比对的非常慢令人满意者划入T和B肝细胞新功能量化。在迄今为止的深入研究里，8名慢令人满意者(SP组成员)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身酪氨酸中性。所有的参加者都始终保持1改进型乳癌令人满意的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身酪氨酸对某些酪氨酸的中性重排，然而，一名症状已经始终保持2期至不及6年，但没有显现成来临床研究疼痛，一名症状被诊断为乳癌，该受试者72岁，在搜集科学研究比对时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化里对该遗传物质透过了单独审计。除去外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多实例流式肝细胞练成和T肝细胞抑止检验审计遗传物质里Treg的Hz、酪氨酸和新功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)透过无监督聚类量化，审计Treg酪氨酸。

结果：与肥胖症遗传物质比起，来自慢令人满意体的无意识CD4+T肝细胞的监督聚类辨识，作用于的无意识CD4+ TregHz增高，与止痛药游离的TNFR具体蛋白质(GITR)解读增高有关。一名HbA1c增高的症状与令人满意非常慢者和最简单的大鼠成员比起，Treg谱有所有所不同。新功能量化暗示，与肥胖症遗传物质比起，来自非常慢令人满意体的Treg介导的CD4+波动T肝细胞抑止相对来说受损。显出为对波动CD4+T肝细胞CD25和CD134解读的抑止增高。

绘出1 侧重的酪氨酸量化辨识，CD4+Treg亚改进型在慢令人满意函数调用里增高。由FlowSOM转化成的Treg室，有数在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标示成物解读解剖成10个元簇:无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个有所不同Treg标示成转化成的10个元簇的MST。每个路由表代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在路由表组成员一处上色。每个路由表里的糕绘出对此单个标示成的解读级别。(b)每个元聚类的热绘出，以辨识整体标示成解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转化成绘出，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的沙质。(e-l)比起同位素为每个metacluster筒终点站绘出(同位素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T肝细胞(l)。紫色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 可用CITRUS的预测模改进型确认，TregHz的增高是令人满意非常慢的标志。国际标准暂时性(a - f)和葡萄量化(g-k)非常SP参加者和最简单的HD参加者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR解读透过除去，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(白斑)组成员以及遗传物质SP 606(紫色)里CD25+ cd127的Hz概述绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性侄集的筒终点站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读风速着色，圆点突成的簇被鉴别为SP和HD函数调用之间的有所不同。(j)筒终点站绘出辨识了在SP(白斑)和HD(灰点)组成员里，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的比起同位素(数量)。(k)直方绘出辨识每个簇的酪氨酸(白色)和Treg标示成比起解读与时代背景解读(紫色);上列，CPUTreg_3;示例一行，CPUTreg_4。时代背景与所有其他簇里标示成的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出3 与肥胖症献血者比起，令人满意非常慢者无意识treg的GITR增高。每个无意识CD4+T肝细胞元簇(无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个解读标示成的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的解读热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR解读串联，辨识直方绘出(c)和概述绘出(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有遗传物质包括，p< 0.05(紫色)遗传物质SP 606和最简单的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR解读，从国际标准暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)串联，辨识直方绘出(e)和概述绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘出4 来自非常慢令人满意的CD4+ treg肝细胞操控波动CD4+T肝细胞的技能增加。SP组成员用紫色的终点站和白点对此，HD组成员用黑色的终点站和白点对此，紫色的终点站/白点对此遗传物质sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(转发者)被标示成为CFSE, Treg按掩蔽的数量溶液。用抗CD3 /28微珠游离肝细胞，培训3天后透过流式肝细胞练成检验。(a-d)与CD4+转发者比起应的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培训。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑止多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止多于。可用中性对照(作用于的号召肝细胞仅有treg)计算抑止多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

绘出5 波动CD4+T肝细胞对非常慢令人满意的T肝细胞游离的抑止更适合于。SP组成员用紫色的终点站和白点对此，HD组成员用黑色的终点站和白点对此，紫色的终点站/白点对此遗传物质sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标示成，treg按掩蔽的数量溶液。用抗CD3 /28微珠游离肝细胞，培训3天后透过流式肝细胞练成(CD25反染)和肝细胞因侄量化。HD Treg与HD、SP或sp606转发者合作培训。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑止前年(b)。(c,d) CD25抑止前年(c)和CD134抑止前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

正确性：我们得成的正确性是，来自非常慢令人满意侄的游离无意识CD4+Treg在GITR解读里得到了扩张和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1改进型乳癌风险幼体里的异质性的必要性。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28